1.病原型別：病毒（Virus）

病原環境：海水、淡水（marine、freshwater）

學名：蛙虹彩病毒(Ranavirus)。

病名（及俗名）：中華鱉虹彩病毒病(Viral Disease of Soft-Shelled Turtle, STIV)或中華鱉病毒病(Trionyx subebus virus, TSV)

最早發現者：張奇亞等(1996)

OIE狀況：未表列（Not Listed）

病原摘要：

中華鱉病毒(TSV)，病毒類粒呈正二十面體，無囊膜，直徑約為30nm，病毒結構蛋白由5條多?組成，分子量分別為85、60、55、18及12kb，其中以18kb含量最多，其次為12kb。人工接種於3至4天後，鱉體表開始顯現出血點，4至5天開始死亡，2至3周內全部死亡。病毒對氯仿、酸(PH3)、鹼(PH9)、200mg/l 次氯酸鈉(sodium hypochlorite)、或加熱60℃15分鐘敏感；病毒在1分鐘溶液內含有150mg/l chlorhexidine(0.75% Nolvasan^R)、180mg/l次氯酸鈉(3% bleach)或200mg/l 過一硫酸鉀(potassium peroxymonosulfate, 1% Virkon^R) 不活化。

人畜共通︰無〔中華鱉，Pelodiscus(Trionyx)sinensis, 屬於爬虫網、龜鱉目(Testudinata)、(有11屬, 鱉科(Trionychidae)、鱉屬(Trionyx)〕

2.病原分類︰

虹彩病毒科(Iridoviridae)：蛙虹彩病毒屬(Ranavirus)。

命名沿革︰例

張奇亞等報告(1996)之中華鱉病毒直徑為30nm，感染主要臟器為肝及脾。陳平等(1997)所報告為另一種中華鱉病毒直徑為35-39nm、無囊膜，主要感染器官為肺、胃、咽喉粘膜及腹甲皮層的小血管和微血管的內皮細胞受損。陳在賢等(1998)則指出中華鱉病毒之直徑為120-160nm，無囊膜，其病毒顆粒存在於細胞核及細胞質中，人工感染顥示該病毒對中華鱉有中等毒力。

疾病特性

　　發病前期症狀為行動遲緩，對外界環境反應的敏感性降低，浮於水面或伏于沙地及攝食停止，體表呈現發病初期之病鱉背甲或腹甲上有許多小出血點，有的鱉因腹甲布滿細小出血點而呈紅色(紅底板)；繼接在體表任何部位均可出現出血性潰瘍，隨著病情加重，潰?由量少面積小而漸擴大變多，並向體表層發展，直至出現穿孔等重症，而後隨病勢不斷加重、擴散，嚴重者死亡，有時由瀕死病鱉臟器中分離出親水性產氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)。2至3周後死亡率達60%以上，如採用藥物治療，病情雖可減弱，外表恢復正常，但攝食仍然遲緩，經一段時間後雖可耐過，然會再次感染流行，此病易發於6至8月間50～250克重幼鱉。依據非正式統計，每年因鱉病流行造成之經濟損失在數億元以上。

　　測定中華鱉虹彩病毒(STIV)的基因組全序列，其基因組(genome)全長為105,890

bp，與虹彩病毒科蛙病毒屬代表種FV3全基因組有98.5%的同源性，G+C含量為55.1%。由生物信息學預測，其編碼區含有105個開放閱讀框(open reading frame, ORF),中42個ORFs和其他物動已鑑定基因具有一定性的同源性；49個ORFs 僅在虹彩病毒科成員中具有類似物，還有14個ORFs為未知基因。

    中華鱉虹彩病毒感染細胞後，引起被病毒感染的細胞呈現經典的細胞凋亡(apoptpsis)，並激活有絲分裂活化蛋白質激?(mitogen-activated protein kinae, MAPK)信號通路，而細胞外信息調節激?(extracellular signal-regulated kinase ERK)及P38MAPK信號通路對STIV復制及病毒誘導細胞的凋亡是必需的；同時STIV感染伴隨著粒線體膜電勢降低，細胞色素C的釋放以及活性氧的增加，可顯示STIV感染誘導粒線體途徑傳導的細胞凋亡。

疾病型態及流行病學

　　本病為急性傳染病，病程短，死亡率高。尤其是幼鱉或鱉苗死亡率達50%以上；發病幼鱉大多無明顯的體表症狀。從不同鱉群採集的病鱉樣品中，觀察到形態結構及分佈一致的病毒顆粒，尤其從外地長距離引進的苗種抵抗力較差，同時對環境的適應能力也較差，容易受病原的侵染，加上病毒性傳染病傳播速度快，因而容易造成鱉群大規模死亡。

    蛙病毒屬(Ranavirus)之疾病分佈美州(南北美州)、歐洲、亞洲及澳洲等各地，均有病原檢出，能感染所有年齡之動物，包括爬虫類、兩棲類與魚類；傳播途徑，由於動物之間彼此的接觸，或經口吃進被病毒污染的食餌，而經被病毒污染的水域及運輸均可傳播本病原。緊迫因子為誘發本病不可忽略的因素之一，如季節變換、飼養管理不佳、過度密飼、野生種與飼養種互為混養。

　　Jancovich et al.(2010)提出一種假設，蛙病毒多物種之跳躍式假說(Ranavirus multiple-species jump hypotheses)，第一種假設是由魚類病原傳至蛙類，後再由蛙類病原傳至鱉類，或魚類帶有(Ambystoma tigrinam virus, ATV)一樣病毒，則病原可能跳躍感染於蠑螈。第二種假設是魚類攜帶最近常見遠古之蛙病毒，則由魚類病原傳染至四足類兩棲動物，或是魚類跳躍傳染至蛙類，亦或魚類傳染至蠑螈，再則發生由蛙類傳染至鱉類，如同蠑螈跳躍再轉回感染魚類。

　　蛙病毒(Ranavirus)感染之宿主包括魚類、兩棲類及爬虫類等低脊椎動物。

1.魚類病原：如流行性造血器官壞死病毒(Epizootic Haematopoietic Necrosis Virus, EHNV)、歐洲鯰魚病毒(European catfish virus)，Europan sheatfish virus (ESV)，Santee-Cooper Ranavirus、(SSRV)，石斑虹彩病毒(grouper Iridovirus，GIV)，新加坡石斑虹彩病毒(Singapore Grouper Iridovirus, SGIV)、大嘴鱸魚病毒(Large mouth bass virus, LMBV)等。

2.兩棲類病原：感染的種類更多，依據Miller et.al. (2011)報導約有15科90種兩棲類物種被感染，其中以蛙病毒3(Frog virus 3, FV3)，飾紋汀蛙虹彩病毒(Bohle iridovirus, BIV)、蛙虹彩病毒(Rana grylio virus, RGV)、虎紋蛙病毒(Tiger Frog virus TFV),Ambystoma tigrinam virus, ATV，又稱為Regina ranavirus為代表。

3.爬虫類病原：

　˙Green pythons (Chondropython viridis ) , 綠?蛇

 ˙Burmese star tortoises (Geochelone platynota)

 ˙Leopard tortoises (Geochelone pardalis), 豹龜

 ˙Gopher tortoises (Gopherus polyphemus)

 ˙Mountain lizard (Lacerta monticola), 山蜥蜴

 ˙Eastern box turtles (Terrapene carolina carolina)

 ˙Florida box turtles (Terrapene carolina bauri)

 ˙Western ornate box turtles (Terrapene ornata)

 ˙Spur-thighed tortoises (Testudo graeca)

 ˙Hermann’ stortoises (Testudo hermanni)

 ˙Egyptian tortises (Testudo kleinmanni)

 ˙Russian tortoises (Testudo horsfieldii)

 ˙Marginated tortoises (Testudo marginata)

 ˙Red-eared sliders (Trachemys scripta elegans)

 ˙Chinese softshell turtles (Trionyx sinensis), 中華鱉

  ˙Gecko (Uroplatus fimbiatus), 壁虎

 

臨床症狀及病理學

發病早期，病鱉頸部，背部皮膚充血或出現出血點，隨著病情的延展增多出血點、擴大(出血點)，有的發病鱉因腹甲佈滿出血點而呈紅色，接著於病鱉體表任何部位均可出現出血性潰?；隨著病情加重，潰?由少量，小面積而擴大變多，並向體表深層發展，直至出現穿孔等重症。

剖檢病死或瀕死的病鱉，可見肝、脾、腸壁充血，在肝的被膜下有大小形狀不一的出血區；肝、脾及?囊明顯腫大；特別是肝臟腫大，為正常等重量鱉體肝重的1.5至2倍大，腸內無食物。腫大充血的肝脾及腎等組織失去彈性，而且易碎。

經人工接種病毒感染之中華鱉，尚未出現體表症狀，發現最早出現病變的器官為肝及脾，肝的最初病症為肝尖被膜下有細下出血點，隨著病情加重，出血點擴大而增多，甚至佈滿整個肝臟表面；脾腫大、充血，病變嚴重之脾組織失去彈性、易碎，在肝臟組織可見局部大量炎症細胞浸潤，細胞及細胞索結構模糊不清，肝細胞呈現萎縮或壞死，微血管壁明顯增厚，形成微血栓。脾臟結締組織，局部形成類粘液堆積，或某些區域形成凝固樣壞死，脾中造血組織之細胞發生核濃縮、核碎裂，形成許多大小形狀不一的壞死病灶，腎絲球體擴張或萎縮，有些絲球體壞死解體，近端腎小管上皮細胞發生均質樣小滴變性(hyaline droplet degeneration)。(.張奇亞、李正秋等，1996、1997)

 

病原致病性意義

中華鱉病毒感染鱉體，主要侵害肝、脾、腎、心、肺及腸管，引起上述器官組織與細胞均呈不同程度地損傷，肝及脾的病變程度較其他組織器官尤為嚴重；可表明肝與脾為中華鱉病毒重要侵害的靶器官。肝和脾的細胞在被病毒感染後，經病毒復製增殖可通過血液循環系統擴散到其他組織，造成各個器宮發生嚴重病變。

由此推論，病毒入侵及在宿主細胞內增殖，使細胞核遭受破壞，細胞腫大，壞死；微血管擴張，小血管壁廣泛受損，並因此激活凝血因子，產生彌漫性血管內凝固(DIC)形成微血栓。在失去大量凝血因子的同時，更加重了出血，使循環血量減少，氧和營養物質得不到正常供應，代謝廢物也得不到及時運送。正常代謝發生障礙，引起臟器組織壞死病灶，臟器組織喪失功能，這可能就是病毒感染後引起鱉群快速死亡的直接原因。同時脾臟為造血組織，當其組織病變壞死時，定影響其造血功能，進而造成鱉體內抗病原體的防禦功能喪失，產生細胞免疫系統功能不全。

一級初步診斷：

依據罹病之中華鱉表現臨床上攝食遲頓及到停止攝食，就應提高驚覺，可能是發病前兆，如再發現病性延順產生病鱉頸部和背部皮膚充血或現出血點，特別是頸部紅腫，所謂的紅脖子病(red neck disease)，就是根據此外觀病變的稱謂。繼而背甲裙邊等皮膚組織開始糜爛、腹部出現紫紅色斑點；隨之背甲上長出數個黃豆大小樣的癤瘡、四肢及脖子附著一層灰白，棉絮狀之粘液層。

二級初步診斷：

可使用病毒分離法，採用鯉魚上皮乳狀瘤細胞(EPC)、鰻魚性腺細胞(EG)、草魚卵巢細胞(CO)等細胞株分離培養病毒,可觀察到病毒增殖與細胞病理變化效應(CPE)。一般在鯉魚上皮乳狀瘤細胞株所引起的細胞變化，形成許多小空斑，空斑逐漸擴大，後全部細胞脫落，無包涵體。在15-30℃下，使用草魚卵巢細胞株培養分離病毒，2天內細胞病變可達90%以上，而在感染病毒之草魚卵巢細胞單層上覆蓋瓊脂後2至3天，能形成直徑約1～1.5毫米邊緣清晰的空斑。

三級初步診斷：目前尚無可應用的方法

一級確定診斷：

可依據上述臨床症狀，剖檢病變、組織病理學、流行病學分析及病毒分離培養，判定是否為中華鱉病毒性疾病；有時必需予另外種疾病鰓腺炎(Parotitis)加以區別，罹患鰓腺炎病鱉頸部皮膚不充血發紅，無紅脖子症狀；病鱉死亡後底板、四肢、尾部不見紅色斑塊與斑點，體色灰白。

二級確定診斷：

(一)電子顯微鏡檢查：

受病毒感染的肝細胞破壞明顯，細胞核嚴重變形、核膜皺縮、核染免質減少甚至消失，核內可見大量散佈的病毒顆粒，核孔周圍病毒顆粒大量堆積，並向細胞質排放。細胞質中可見同樣散佈的病毒顆粒及包涵體。病毒顆粒直徑約25～30nm，無囊膜，粒線體中也可發現病毒顆粒，內質網擴張、空泡變性(.陳平、池信才等、1997)。

(二)血清學檢測方法

1.雙向免疫擴散測試

2.酵素聯免疫吸附試驗(ELISA)測試：

病鱉組織均質漿液、中華鱉病毒細胞培養液及經差異離心純化的中華鱉病毒稀釋100倍與中華鱉病毒抗體均呈陽性反應。

三級確定診斷：

(一)可使用PCR加上限制性內切?操作合併檢測，其primer依據major capsid protein (MCP)上的保守區域設計出兩組primer, MCP-1包括

M151：AAC-CCG-GCT-TTC-GGG-CAG-CA

M152：CGG-GGC-GGG-GTT-GAT-GAG-AT；MCP-2包括

M153：ATG-ACC-GTC-GCC-CTC-ATC-AC

M154：CCA-TCG-AGC-CGT-TCA-TGA-TG，其操作步驟可參閱manual of diagnostic tests for aquatic animal, 2012；第2.1.2章。

(二)巢式PCR (nest-PCR) 檢測法：由張旻等建立(2011)利用生物信息學之套裝軟體 DNASTan和primer 5，依據中華鱉虹彩病毒 (STIV) 主要核衣殼蛋白 (major capsid protein, MCP)基因的高度保守區設計並合成外引物

P1：5’-CGC-ATG-TCT-TCT-GTA-ACT-GG-3’

P2：5’-CGT-TAC-AAG-ATT-GGG-AAT-CC-3’目的基因大小估計為1392BP；內引物

P3：5’-CGC-GAT-AGG-CTA-CTA-TAA-CAT-GG-3’

P4：5’-AGA-TGT-TGT-GTG-ACG-TTC-TGC-ACC-3’目的基因大小評估為500bp產物，

此方法可同時檢測EHNV、STIV及TFV三種蛙虹彩病毒，最低可以檢測10²拷貝數的病毒顆粒，是普通PCR方法的100倍。而且與其他非蛙虹彩病毒無交叉反應，特異性良好。

1.養殖中華鱉場地(在鱉池放養前，最好進行整地，可使用3kg/m³池水生石灰浸漬清塘)、水質，使用工具及餵餌台都要進行清掃及消毒。

2.嚴格執行檢疫制度，新移植入場之外來幼鱉需隔離飼養觀察至少4週。

3.加強飼養管理，餌料投飼營養值量必需完整。

4.可潑撒複合光合菌，保持水質優良環境，穩定飼養不要密飼，減少環境緊迫因子，提高鱉體抵抗能力。

5.使用複合光合菌能使鱉池水質的溶氧增高，氨氮、化學耗氧量、硫化物降低，同時能提高鱉體成活率及增重率，並降低鱉體的發病機率。

6.飼養水質的調整、控制。

 a.養鱉池水要求微鹼性，ph值在7.5～8.0，溫度要保持相對穩定。

　b.水質保持一定肥度、透明度控制在25～30cm，水色以黃綠色或黃褐色為佳。

　c.保持一定的溶氧量，鱉體雖然以肺呼吸為主要行使功能，但大部份時間生活於水中，靠輔助呼吸器官吸收水中氧氣，若長期水中溶氧量不足，就可能罹患鱉低溶氧綜合症。

7.注水換水是調節水質的物理方法，頻繁換水容易造成鱉體產生緊迫反應和破壞原有的生態平衡，所以換水應以適量添加水為主，不要大量排水、進水。

8.注重疾病的預防工作，依據鱉體生長階段發病特點與平常觀察是做好預防工作之重點。

a.平時每隔20天消毒一次，所使用消毒劑最好更替輪放使用。

1.陳信中、黃印曉、顏江華、倪子綿。中華鱉(TSV)的致病性及電鏡觀察。福建畜牧獸醫。1998;4:6-7。

2.陳平、池信才等。養殖中華鱉一種球形病毒的電鏡觀察。廈門大學學報(自然科學版)；1997；36(4):626-630。

3.陳在賢、鄭堅川、江育林。從患“紅脖子病”的甲魚體內分離到虹彩病毒。中國獸醫學報。1998;18(2):135-139。

4.張奇亞、李正秋等。中華鱉病毒病原的發現。科學通報。1996;41(20):1987-1990。

5.張奇亞、李正秋。中華鱉病毒病的組織病理研究。水生生物學報。1997;21(4):375-378。

6.張旻、林祥梅、江育林。蛙虹彩病毒巢式PCR檢測方法的建立。中國水產科學。2011；18(3):661-666。

7.李曉莉、曾令兵、張燕、何力、許映芳。中華鱉5種組織細胞的離體培養實驗。2010;3(2):111-115。

8.張奇亞、李正秋、桂建芳。中華鱉病毒感染宿主的細胞病理學研究。病毒學報。1999;1:54-58。

9.Huang X, Huang Y, Quyang Z, Xu L, Yan Y et al. Singapore grouper irdovirus, a large DNA virus, induces nonapoptotic cell death by a all type dependent fashion and evokes ERK signaling. Apoptosis, 2011; 16(8):831-845.

10.Huang Y, Huang X, Cai J et al. Involvement of mitogen-activated protein kinase pathway in soft-shelled turtle iridovirus-induced apoptosis. Apoptosis, 2011; 16(6):581-593.

11.Jancovich JK, Bremant M, Touchman JW, Jacobs BL. Evidence for Multiple Recent Host Species Shigts among the Ranaviruses (Family Iridoviridae). Journal of Virology. 2010;84(6):2636-33647.