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傳染性造血組織壞死症
疾病代碼: DIS00156
建立日期: 2009/02/12
更新日期: 2009/09/08
作 者: 趙嘉本
中文病名: 傳染性造血組織壞死症
英文病名: Infectious haematopoietic necrosis
疾病描述: 病原型別:virus(病毒)
病原環境:fresh water or sea water(淡水或海水)
學名:
病名(及俗名):
最早發現者:於1940-1950年間於北美太平洋岸區於幼鮭魚發生嚴重疫情,之後認定是感染IHNV(wolf 1988)
OIE狀況:表列(Listed)
病原摘要:
IHNV 病毒為Novirhabdovirus 病毒外觀形狀為子彈樣(bullet shaped),一般大小為其長度約150-190nm間直徑約65-75nm(Roberts 2001),為一negative-sense 單股RNA病毒,分子大小約11,000 個nucleotides 轉譯後具有6個病毒蛋白分別為 nucleoprotein (N), phosphoprotein (之前稱為 M1), a matrix protein (之前稱為 M2), glycoprotein (G), non-virion protein (NV), and 及 polymerase (L)。
病毒對熱(heat)、酸(acid)及 乙醚(ether)不穩定。但於淡水中至少可存活1個月,特別於水中富有有機物質(organic material)時會更穩定,一般之消毒劑或乾燥可不活化病毒(wolf 1988)。
本病毒可感染之魚種主要有: rainbow or steelhead trout (Oncorhynchus mykiss), brown trout (Salmo trutta), Pacific salmon including chinook (O. tshawytscha), sockeye (O. nerka), chum (O. keta), masou (O. masou), coho (O. kisutch), and Atlantic salmon (Salmo salar). 等。
人畜共通:無
病原分類: 為Rhabdoviridae 科中之Novirhabdovirus 。
疾病特性:
本病感染之魚隻其死亡情形與魚年齡有相當密切之關係,一般幼魚對病毒相當敏感,較大之魚具有某程度之抵抗力。好的環境可降低本病之危害。於自然環境下本病主要發生之水溫為8-15℃ 之間(OIE 2006)。
死亡率與環境溫度、病毒珠(virus strain)等皆有關,如嚴重時通常其累計死亡率(cumulative mortality) 可達90-95%,如變成慢性(chronic cases)則通常各種病程皆可被觀察到,疾病感染中如再繼發二次性之細菌感染如Flavobacterium psychrophilium 通常死亡是會相當嚴重。
感染組織及器官:
當於感染階段在於腎、脾、腦、及消化道是富有傳染性造血組織壞死病毒(IHNV)。
感染路徑:
IHNV 病毒主要以水平傳染(horizontal),但經由魚卵而行垂直感染(egg-associated)亦有紀錄,慢性帶病毒之魚隻(carriers)其病毒可經由其糞(faeces)、尿(urine)、生殖液(sexual fluids)及外分泌之粘液(external mucus)而排出。
臨床症狀及病理學:
病魚之外觀有呈昏睡樣(lethargy)、不正常活動、魚體表變黑(darkening of the skin)、鰓部蒼白(pale gills)、腹水(ascites)、腹部腫大、凸眼、身體各處之點狀出血(petechial haemorrhages)、魚隻呈現貧血同時剖檢中消化道並無發現無內容物等。
於病理學上可見為於腎(kidney)(圖1)、脾(spleen)、肝(liver)等之造血組織(haematopoietic tissues)之變性與壞死,消化道與或胰臟亦有感染後造成壞死情型,血中之血容比(haematocrit)減少、白血球(leukocytes)及血栓球(thrombocytes)亦有不同程度之變性。
診斷方法: 1 臨床上本病發生幼魚感受性高、較老之魚隻具有明顯之抵抗力、水溫於8-15℃之間。

2 細胞培養配合免疫學:具感受性之細胞為EPC 及BF2 細胞並配合螢光抗體或中和試驗等 (Amzen et al 1991; Dixon et al 1984)

Polymerase chain reaction (OIE 2006)
病毒RNA抽取
收集已產生CPE細胞之培養液,經2,000g 離心15分鐘後取上清液進行RNA 抽取。PCR所使用之引子對分別為Upstream Primer 5'-TCA-AGG-GGG-GAG-TCC-TCG-A-3';及Downstream Primer 5'-CAC-CGT-ACT-TTG-CTG-CTA-C-3'; 反應之條件

於50℃下反應15分鐘 之後 95℃ 2 分鐘。25個循環分別為 95℃ 30秒、50℃ 30秒、72℃ 1分鐘。最後72℃ 7分鐘。其RT-PCR之產物大小為786 bp。

nested PCR 將上述之產物當做DNA,nested PCR所使用之引子對分別為Upstream Primer 5'-TTC-GCA-GAT-CCC-AAC-AAC-AA-3、Downstream Primer 5'-GCG-CAC-AGT-GCC-TTG-GCT-3' 其反應之條件為
95℃ 2分鐘、25個循環 分別為95℃ 30秒、50℃ 30秒、72℃ 1 分鐘之後72℃ 7分鐘。其產物大小為323 bp。

Knusel et al 2007 等人研究中所使用之RT-PCR 其敏感度要比細胞培養為佳,其所使用之條件如下:
Total RNA:使用trizol (Invitrogen, Basel, Switzerland)
引子對分別為(Primer sequences used constructed according to Bergmann et al. 2000)
IHNV-N IN-1F 5-CAG-AGA-CGG-AGT-ATC-GTC-CC-3
IHNV-N IN-2R 5-ACA-ACC-TCA-AGG-ACA-TTT-TCC-3
產物大小為310bp
條件為 使用 (Qiagen OneStep_ RT-PCR-Kit; Qiagen, Basel, Switzerland)

其它使用RT-PCR 偵測之IHNV 可參考Barlic-Maganja 2002等人之研究。
治療方法:
預防控制方法: 詳細討論疫苗發展現況及飼養管理控制現況
本病使用疫苗控制仍處於實驗階段,目前發展中有killed vaccines 及DNA疫苗等。
目前控制本病最佳方法為不要接觸到病毒,場內應有相當良好之環境衛生,,因此魚卵之消毒、卵及魚苗培育過程保持水中無病毒(virus –free water)以是相當重要,同時應避免與可能帶毒生物之接觸。
相關圖片:
Fig 1於sockeye salmon (Oncorhynchus nerka)之後腎(posterior kidney),以人工感染IHNV 病毒後之第三天其造血組織(箭)嚴重壞死,但腎小管確未受影響。(From Dr Diane Elliott Western Fisheries Research Center U.S. Geological Survey Seattle USA)
參考文獻: Arnzen JM, Ristow SS, Hesson CP. Lientz J. Rapid fluorescent antibody tests for infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) utilizing monoclonal antibodies to the nucleoprotein and glycoprotein. J. Aquat. Anim. Health, 3: 109-113, 1991.
Barlic-Maganja D, Trancar M, Hostnik P, Jencic V, Grom J. Comparison of the efficiency and sensitivity of virus isolation and molecular methods for routine diagnosis of infectious haematopoietic necrosis virus and infectious pancreatic necrosis virus. J Fish Dis 25:73–80, 2002.
Bergmann SM, Einer-Jensen K, Mortensen HF, Enzmann PJ, Lorenzen N, Olesen NJ. Development and examination of RT-PCR for the identification of VHSV and IHNV in cell culture and fish tissue. Fourth Annual Meeting of National Reference Laboratories for Fish Diseases, Brussels, 26–27 September, 2000.
Dixon PF, Hill BJ. Rapid detection of fish rhabdoviruses by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Aquaculture, 42: 1-12, 1984.
OIE (2006) Manual of Diagnostic Tests for Aquatic Animals.World Organisation for Animal Health (http://www.oie.int).
Wolf K. Infectious hematopoietic necrosis. In: Fish Viruses and Fish Viral Diseases. Cornell University Press, Ithaca, New York, USA. pp. 83-114, 1988.
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