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鏈球菌感染症
疾病代碼: DIS00159
建立日期: 2009/02/12
更新日期: 2010/11/18
作 者: 趙嘉本
中文病名: 鏈球菌感染症
英文病名: Streptococcosis
疾病描述: 病原型別:細菌( bacteria)
病原環境:主要於淡水或半淡鹹水(brackish water and freshwater)
學名:主要病原有 Streptococcus iniae,Streptococcus agalactiae and Lactococcus garvieae
鏈球菌感染症最早發生於1957年地點在日本養rainbow trout (Hoshina et al. 1958). 之後陸續多種魚種後其感染含 salmon, mullet, golden shiner,pinfish, eel, sea trout, tilapia, sturgeon, and striped bass 等 (Inglis et al. 1993)。
.於本省可感染多種養殖魚種如金目鱸giant seaperch (Lates calcarifer)、吳郭魚tilipia(Tilapia nilotica x Tilapia aurea)、午仔striped thread fish (Polydactylus plebeius)、及海鱺cobia (Rachycetron canadum) 烏魚mullet及條紋鱸等魚種。
國外發生魚種鏈球菌感染症於報告中常發生於較高水溫 (Nguyen et al. 2001),此情行與本省南部養殖魚類鏈球菌感染症常發生於夏季高水溫之情形相似
病原摘要:
OIE 現:未表列(Not listed)
人畜共通:人畜共通 (如Streptococcus iniaeStreptococcus agalactiaer 皆有感染人之病例)
病原分類:
為Gram 陽性球菌屬於乳桿菌目(Lactobacillales)-鏈球菌科Streptococcaceae-鏈球菌屬(Streptococcus)。
命名沿革:
疾病特性:
於本病好發於夏季或水溫高季節,於高密度之養殖環境中治療上常會再復發。
臨床症狀及病理學:
魚隻體色變黑(darkening)、浮游於池面、具神經症狀樣之異常泳姿erratic swimming (such as spiraling or spinning);、倦躺於池邊等。
剖檢上各種魚種主要可見體表多處出血病灶,部份魚之可見眼球突出(exphthalmia)、或角膜混濁 (cornel opacity )肝臟充出血,鰓蓋內充出血、鰓絲潮紅,腹水(ascites)、腹膜炎 (peritonitis)、脾臟腫大(enlargement of spleen)及偶有於體表及肛門有出血之病變(petchiae around the anus)另於金目鱸之鏈球菌感染症中偶可見出肌肉出血情形等病變(圖1)(Tung et al 1985)
顯微病理:各魚種之組織病理變化上主要如下
肝臟出現細胞空泡、壞死、部份肝胞腫脹,表面覆有大量炎症細胞、纖維滲出物及球形菌體。脾臟:單核球炎症細胞浸潤,淋巴細胞減少消失,原有淋巴細胞為類上皮細胞所取代。並可見類上皮細胞具有吞噬細菌之情行(phagocytosis)。心臟:心外膜炎(epicarditis),及心肌炎(myocarditis), 鰓充血現象和部分鰓上皮細胞剝離,並於二級鰓薄板微血管腔中見球形之細菌。肌肉:於金目鱸之病例中偶可見肌肉出血,肌束呈均質樣變性(hyaline degeneration)並於肌束間可見球形細菌出現。
實際魚場及田間發病、抗藥性情形
近數年來很少發生抗藥性之情形,一般藥物敏感性試驗中amoxicillin、 erythromycin 、tetracycline 仍有相當之敏感性,但現場治療後不久常會再發,造成養殖管理上相當之困擾。
診斷方法: 1 臟器抹片經劉氏染後可見球狀細菌散於細胞間及吞噬細胞內(圖2)
2 培養:一般之可由病魚之肝( Liver)、脾(Spleen)、腎(Kidney)、心(Heart)、眼(Eye)腦(brain)等臟器釣菌培養於 BHI (brain heart infusion agar ; Merck公司)或血液培養基(blood agar plate plate)上,於28℃下經 24-48小時培養可長出細小(約1mm直徑)之菌落,經Gram 氏染色後可見為Gram 陽性球狀細菌,如以人醫常使用之 API 20 Strep方法鑑定常無法正確有效鑑定出種類。
3 分子生物學診斷
DNA之抽取:純化後之細菌可使用
1、一般科技公司所生產之kit (如Viogen 或Qiagene 等) 按其步驟可抽出純度高之菌體genomic DNA。
2、傳統方式抽取菌體DNA
使用將純化菌落刮下(約一小loop量),放入1.5 ml ependorff 加入0.85 % saline 做成菌液,離心5000rpm, 4℃, 10 min 取棄上清取pellet,加入250μl 之1 Χ TE buffer (10mM Tris 1mM EDTA pH=7.2) 及10μl Lysozyme (250mg/ml in Tris buffer),置37℃培養箱60分鐘,加2Χ disruption buffer 250μl( 200mM Nacl 20mM Tris-Hcl pH=8.0 50mM EDTA 1% SDS )及加入20ul之proteinase K(10mg/ml)置於65℃水浴槽中作用3小時,之後加入等體積之phenol/choroform/ isoanyalcohol(25:24:1),均勻混合之後離心 14000rpm, 4℃, 5mins,取上清液,加入等體積之choroform/ isoanyl alcohol(24:1) 均勻混合之後離心 14000rpm, 4℃, 5mins取上清液。加入0.1 Χ體積之sample 3M sodium acetate(pH=5.2) 與2.5 Χ體積之100% alcohol後置於-20℃ overnight。離心14000rpm ,4℃, 30mins 取pellet,以1000μl 70% alcohol洗後離心14000rpm ,4℃, 5mins取pellet,以真空離心乾燥機抽乾樣本。將乾燥的DNA以適量的二次蒸餾水回溶,並經分光光度計定量(一般定成0.1ug/ul)後保存於-20℃下備用。
PCR反應
Streptococcus iniae 可使用LOX-1 AAGGGGAAATCGCAAGTGCC
LOX-2 ATATCTGATTGGGCCGTCTAA 引子對其PCR 產物為870bp (Mata et al 2004; Anta et al 2004)
Lactococcus garvieae (junior synonym Enterococcus seriolicida) 則常發於烏魚(mullet)其診斷上使用 Zlotkin 1998 所使用之引子對pLG-1 CATAACAATGAGAATCGC 及pLG-2 GCACCCTCGCGGGTTG
一般PCR使用之條件如 於 50 μL 反應液中含有2mM dNTP , 0.4 μM 引子,0.04 U/μl聚合脢 , 及 0.1 μg DNA 及1X 之反衝buffer
其反應中。反應之條件一般下如 94℃ 3 min 之後 32 循環 94℃ 1 分鐘, 55℃ 1 分鐘 72℃ 1分鐘,最後72℃ 7分鐘。反應後於電泳後有其特殊之PCR產物。
治療方法: 使用藥物前藥物敏感性試驗是有其必要性,Darwish and Ismaiel 2003; Darwish and Hobbs 2005 中提到Amoxicillin 可有效控制鏈球菌感染,其建議量為80mg/kg 魚體重連續使用8-12 天。另紅黴素(erythromycin)亦常為控制鏈球菌有效之藥物,通常建議使用之天數約10-14天。

於本省如依官方制定之「水產動物用藥使用規範」建議量 erythromycin 或amoxicillin 用於常發生之吳郭魚tilipia(Tilapia nilotica x Tilapia aurea)或金目鱸giant seaperch (Lates calcarifer) 等魚種之鏈球菌感染症之治療 其劑量為50mg/kg body weight 連續使用3-5 天方式進行治療其結果通常會失敗。現場經驗中如劑量一樣時治療時間通常須有7-9天以上,但其結果仍會經一段時間後再復發。
預防控制方法: 國內目前尚未有疫苗上市可供防治使用。但於國外吳郭魚tilapia (Oreochromis niloticus) 感染Streptococcus agalactiae (group B) 在疫苗之試驗上有相當程度之保護效果Evans et al 2004
相關圖片:
圖1金目鱸之鏈球菌感染症中常可見出肌肉出血等病變。
圖2脾臟抹片經劉氏染後可見球狀細菌散於細胞間及吞噬細胞內。
參考文獻: Darwish AM, Ismaiel AA. Laboratory efficacy of amoxicillin for the control of Streptococcus iniae infection in sunshine bass. J Aquat Anim Health 15 (3):209-214, 2003..
Darwish AM, PlaceCityHobbs MS. Laboratory efficacy of amoxicillin for the control of Streptococcus iniae infection in blue tilapia. J Aquat Anim Health 17 (2): 197-202, 2005.
Tung MC, Chen SC, Tasi SS. General septicemia of streptococcal infection in Cage cultured Tilapia, Tilapia mossambica, in Southern Taiwan. COA fisheries series No4 Fish Disease Research VII ,95-105, 1985.
Hoshina T, Sano T, Morimoto Y. A Streptococcus pathogenic to fish. Journal of Tokyo University of Fisheries 44: 57-68, 1958.
Mata AI, Gibello A, Casamayor A, Blanco MM, Domínguez, L, Ferna´ndez-Garayza´bal JF. Multiplex PCR Assay for Detection of Bacterial Pathogens Associated with Warm-Water Streptococcosis in Fish Appl Environ Microbiol. 3183–3187, 2004.
Nguyen, H, Kanai TK, Yoshikoshi K. Experimental Streptococcus iniae infection in Japanese flounder Paralichthys olivaceus Fish Pathol 36(1): 40-41. 2001
Zlotkin, A, Eldar A, Ghittino C, Bercovier H. Identification of Lactococcus garvieae by PCR. J. Clin. Microbiol. 36:983–985, 1998.
Ana I, Mata M, Mar Blanco, Lucas Dom´ınguez, José F. Fernández-Garayzábal, Alicia Gibello. Development of a PCR assay for Streptococcus iniae based on the lactate oxidase (lctO) gene with potential diagnostic value. Vet Microbiol 101:109–116, 2004.
Joyce J, Evans A, Phillip H. Klesius B, Craig A. Shoemaker Efficacy of Streptococcus agalactiae (group B) vaccine in tilapia (Oreochromis niloticus) by intraperitoneal and bath immersion administration Vaccine 22 3769–3773, 2004.
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