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柏金絲病
疾病代碼: DIS00185
作 者: 趙嘉本
中文病名: 柏金絲病
英文病名: Perkinsosis Infection with Perkinsus olseni
疾病描述: 描述
1.病原概述
病原型別:原生動物(protistan parasites)
病原環境:海水
學名:Perkinsus olseni
病名(及俗名):
最早發現者:
OIE狀況:表列(Listed)
病原摘要:
全世界之體動物(mollusks)因perkinsus 之感染造成嚴重死亡(severe mortalities )及經濟損失(significant economic losses) (Villalba et al 2004)。病原可於離開宿主(host)數天至幾星期,因其有一細胞壁(thick cell wall),但於淡水中不穩定,在淡水中常溫下存活時間少於10分鐘,6ppm之氯作用30分鐘同樣可殺死病原(Goggin 1995),其生活史中之任一階段都可感染宿主。

人畜共通:無(No)
病原分類
2.病原分類:原生動物中之Perkinsus

 命名沿革:重要的幾次命名歷史文獻

疾病特性
 感染組織及器官:感染路徑、好發組織器官

所有器官之結締組織及血細胞(connective tissue of all organs, haemocytes)。

疾病型態及流行病學:急性慢性型態、器官傳播分佈情形

可被感染之體動物相當多如,蛤類(clams)含 Anadara trapezia, Austrovenus stutchburyi, Tapes decussatus, Tapes philippinarum, Pitar rostrata。牡蠣( oysters): Crassostrea gigas, Crassostrea ariakensis, Crassostrea sikame。真珠牡蠣 (pearl oysters): Pinctada margaritifera, Pinctada martensii; abalone - Haliotis rubra, Haliotis laevigata, Haliotis scalaris, Haliotis cyclobates (2, 16, 18, 24, 28)。其它雙殼貝 (bivalve) 及腹足綱體動物( gastropod) 亦有可能被感染寄生 (Hamaguchi et al 1998)。


臨床症狀及病理學:
為一種致命性之感染(infection is lethal ),但死亡往往是感染後1-2年才發生(OIE 2006)
肉眼上常可見水樣組織(watery tissue)、消化腺蒼白、有些宿主之鰓上會有結節(nodules in gills)。但這些並非感染 Perkinsus olseni 之專一病變。

組織病理學
活或剛死亡之體動物(freshly dead mulluscs)為佳,樣本可以Davidson’s 固定液固定,組織中應含有消化腺體及鰓。於在結締組織中可見局部多發病變同時含有P. olseni ,伴隨血細胞浸潤(haemocyte infiltration)及吞噬情形,於蛤(clam)切片中病原常被一的嗜酸性物質(thick layer of eosiniophilic material)所包圍(encapsulated),病原大小約 5-15um蟲體為球狀,蟲體具具有一大空泡及偏於一邊之核,perkinsus olseni於H&E 染色下呈藍色。此方法於感染中度到嚴重時容易被觀察到,但無法區別是何種perkinsus 所引起(OIE 2006)。



病原致病性意義:實際魚場及田間發病、抗藥性等情形
診斷方法: 臨床及組織病理學:如上述
可使用smear 病材經Giemsa staining 以400X 觀察可見到病原(5-15um)其具有一大空泡及偏於一邊之核(with a large vacuole and eccentric nucleus),此方法無法區別何種species。

病原培養:whole body burden assay (Almeida et al 1999) :將病材切成2-5mm大,放入fluid thioglyocollate culture medium(含抗生素),於黑暗中培養4-7天後,1,500g 離心10分鐘去上清,加入2M NaoH(20ml/g 組織) 於60℃下培養2-6小時,1500g 離心10分鐘後去上清,所留下之pellet 以蒸餾水洗3次後,pellet 並溶於 Logol’s 溶液。其結果蟲體大小會變大由5-15um 到50-70um 其壁會染成藍色或帶有點藍之黑色(bluish-black)(圖1)(Ray 1966)。
其它亦可使用 Ray’s fluid thyoglycollate culture (OIE 2006)

分子生物學
DNA之抽取:可使用一般市售之kit 如Qiagen等,依Robledo 2000 所設計之引子對分別為5'-ATG-CTA-TGG-TTG-GTT-GCG-GAC-C-3' 及5'-GTA-GCA-AGC-CGT-AGA-ACA-GC-3' ,其產物大小為690bp。 反應條件為94℃ 4 分鐘,之後35個循環 92℃ 1分鐘、60℃ 1分鐘(每一循環加1秒)、72℃ 1分鐘(每一循環加2秒),最後 72℃ 7分鐘。

Abollo 2006 研究中所使用之引子並配合內核酸酵素(endonucleases),可診斷柏金絲症同時可確立是何種(Perkinsus species)引起。
其所使用之引子對為引用Casas et al 2002 分別為ITS-85 5-ccg ctt tgt ttg ga/c tcc c- 3,及 IITS-750 5-aca tca ggc ctt cta atg atg- 3 。
其反應條件為 94℃ 5 分鐘, 35個循環 94℃ 45秒、55℃ 45秒、72℃ 1分鐘,最後72℃ 10分鐘。
產物配合(Hinf I and Rsa I)可區分是何種所引起。
治療方法: 詳細討論如何治療、療效情形
化學治療上cyclohexamide, pyrimethamine, deferoxamine (DFO) and 2, 2-bipyridyl 等於體外試驗中 可抑制 P. olseni and 而DFO 可體外及宿主內皆可抑制 P. olseni (13)
Bacitracin 也許可有效抑制P. marinusP. olseni.( Faisal et al 1999)

Ps. 上述所有藥物皆不可使用,因國內法規中之水產動物用藥使用規範中未列入。
預防控制方法: 詳細討論疫苗發展現況及飼養管理控制現況
目前無疫苗可供使用,選具有抵抗性之品種,目前有可抗P. marinus 之品種但此品種無法抵抗P.olseni之感染(Ragone et al. 2003)。
相關圖片:
經培養後之P. olseni 蟲體變大約50-70um(圖片參考來源:http://www.ifremer.fr/crlmollusc/page_labo/leaflets/perkinsus_olseni2.htm)
參考文獻: Almeida M, Berthe F, Thebault A, Dinis MT. Whole clam culture as a quantitative diagnostic procedure of Perkinsus atlanticus (Apicomplexa, Perkinsea) in clams Ruditapes decussatus. Aquaculture, 177: 325-332, 1999.

Faisal M, La Peyre JF, Elsayed EE. Bacitracin inhibits the oyster pathogen Perkinsus marinus in vitro and in vivo. J Aquat Anim Health 11: 130-138, 1999.

Goggin CL, Lester RJG, Perkinsus, a protistan parasite of abalone in Australia: a review. Aust J Mar Freshwater Res. 46, 639-646, 1995.

Hamaguchi M, Suzuki N, Usuki H, Ishioka H. Perkinsus protozoan infection in short-necked clam Tapes (=Ruditapes) philippinarum in Japan. Fish Pathol., 33: 473-480, 1998.

OIE (2006) Manual of Diagnostic Tests for Aquatic Animals.World Organisation for Animal Health (http://www.oie.int).

Ragone Calvo LM, Calvo G.W. Burreson E .M. Dual disease resistance in a selectively bred eastern oyster, Crassostrea virginica, strain tested in Chesapeake Bay. Aquaculture, 220: 69-87, 2003.

Ray SM. A review of the culture method of detecting Dermocystidium marinum with suggested modifications and precautions. Proc. Natl. Shellfish Assoc. 54: 55-69, 1966.

Robledo JAF, Coss CA, Vasta G.R. Characterization of the ribosomal RNA locus of Perkinsus atlanticus and development of a polymerase chain reaction-based diagnostic assay. J. Parastol. 86: 972-978, 2000.

Villalba A, Reece KS, Orda’ s MC, Casas SM, Figueras A. Perkinsosis in molluscs: A review. Aquat Liv Res. 17: 411–32, 2004.
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