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柏金絲病
疾病代碼: DIS00155
建立日期: 2009/02/12
更新日期: 2009/09/10
作 者: 趙嘉本
中文病名: 柏金絲病
英文病名: Infection with Perkinsus marinus
疾病描述: 應包含下列細項
描述
1.病原概述
病原型別:原生動物(protistan parasites)
病原環境:海水
學名:Perkinsus marinus
病名(及俗名):Dermo" Disease, Proliferative disease, Perkinsosis
最早發現者:
OIE狀況:表列(Listed)
病原摘要:
Perkinsus marinus 因具有一厚的細胞壁因此於外界相當穩定,但乾燥(dessication )、加氯處理(chlorination)及 UV 可使Perkinsus marinus 不活化(Bushek et al 1997)。病原生活史中之任一階段皆可感染。
人畜共通:目前無法証實可感染人
2、病原分類:Class:Perkinsea、Order:Perkinsida、原生動物中之Perkinsus屬 
命名沿革:重要的幾次命名歷史文獻
疾病特性
 感染組織及器官:感染路徑、好發組織器官
腸上皮細胞(gut epithelium )、所有器官之結締組織(connective tissue of all organs)及血細胞(haemocytes)。
 疾病型態及流行病學:急性或慢性型態、器官傳播分佈情形
感染牡蠣品種中以Crassostrea virginica 最具感受性,且會隨年齡增加而變嚴重,其它如C. gigas and C. ariakensis 等雖可感染但不會使其發病(Andrews 1996)。
病原之傳播仍宿主直接到宿主(host to host)無須中間宿主,蟲體之任一階段皆具感染性。疾病之傳染常由死亡之牡蠣或被感染牡蠣排泄物(faeces)經由消化系統感染其它牡蠣。
臨床症狀及病理學:
臨床上可見病牡蠣呈水樣組織、消化腺蒼白等病灶,但這些皆非特異性之病變(OIE 2006)。
於腸上皮細胞及任何器官之結締組織皆出現局部多發之病變,同時有血細胞浸潤及吞噬情形,於嚴重感染病例中可見腸上皮細胞幾乎完全被破壞。
切片下可見蟲體約2-10 µm(直徑)其具有一大空泡及偏於一邊之細胞核,Perkinsus marinus 之染色性為嗜鹼性。
病原致病性意義:實際魚場及田間發病、抗藥性等情形
診斷方法: 臨床上病牡蠣會死亡或開口(非專一性之變化)
抹片法:將病材(如血淋巴)抹片經Giemsa 後可見球形大小約2-15 µm之原蟲,遺具有一大的空泡及偏於一邊之細胞核(with a large vacuole and eccentric nucleus)。此方法無法區別是何種perkinsus

病原之培養:
Ray's fluid thyoglycollate culture
可將病牡蠣之鰓、直腸及套膜等組織切成5-10mm大小後放入每mL含有500 units penicillin G 、 500 mg dihydrostreptomycin 及 200 units mycostatin (Nystatin) 之fluid thioglycollate medium (Difco)。於暗環境22-25℃ 培養4-7天。取出樣本並加入Lugol's iodine(1/5) 約經過10分鐘後鏡檢。

Whole body burden assay (Fisher 1996):將病牡蠣整隻切成2-5mm大小後放入每mL含有500 units penicillin G、500 mg dihydrostreptomycin 及 200 units mycostatin (Nystatin) 之fluid thioglycollate medium (Difco) 並經上述環境培養後以1,500g 離心10分鐘,去上清並加入 2M NaOH (20 ml/g 組織) 於60℃下作用2-6小時。離心1,500g 離心10分鐘去上清,之後以去離子水水洗三次後回溶於1 ml 之Lugol's iodine solution, 並計算蟲數。
蟲體之大小由2-10Mm 到20-70uM 大小,蟲體成圓形其壁為藍黑色到藍色(圖1)。


分子生物學
Robledo 1998 所使用之引子對分別為5' CAC TTG TAT TGT GAA GCA CCC 3' and 5'-TTG-GTG-ACA-TCT-CCA-AAT-GAC-3' 其PCR 產物為蟲體NTS 區之核酸序列,產物大小為307bp 其使用之條件分別為 91℃ 3 分鐘,之後35個循環分別為91℃ 分鐘、58℃ 1分鐘((每循環增加1秒)、72℃ 1分鐘(每一循環增加 2秒),最後72℃ 10分鐘。

Audemard 2004 使用蟲體之ITS 區設計引子對分別為5'-CTT-TTG-YTW-GAG-WGT-TGC-GAG-ATG-3' and 5'-CGA-GTT-TGC-GAG-TAC-CTC-KAG-AG-3 其反應條件為94℃ 分鐘, 之後40個循環分別為94℃ 1分鐘、57℃ 分鐘℃ 、66℃ 分鐘,最後65℃ 10分鐘。 其產物大小為509bp。
治療方法: 化學治療:Calvo 1994 研究使用Bacitracin 及 cycloheximide 可減緩P. marinus 感染之情況但無法完全根治(上述藥品未列於水產動物用藥使用規範中)。
預防控制方法: 疫苗使用:無
免疫刺進物: 無(none)
抗病品種之篩選:Reece 2001 已証實有些品種之牡蠣可有效降低因P. marinus 之感染所造成之損失。
相關圖片:
Perkinsus marinus感染之Crassostrea virginica經培養後以 Lugol's iodine 染色後可見蟲體 (6個變大之蟲體-黑色或藍黑色)。 圖片參考來源:http://www.pac.dfo-mpo.gc.ca/sci/shelldis/pages/pmdoy_e.htm
參考文獻: Andrews JD. History of Perkinsus marinusa pathogen of oysters in Chesapeake Bay 1950-1984. J Shellfish Res. 15: 13-16, 1996.
Audemard C, Reece KS, Burreson EM. Real-time PCR for the detection and quantification of the protistan parasite Perkinsus marinus in environmental waters. Appl Environ Microbiol 70: 6611-6618, 2004.
Bushek D, Ford SE, Allen SK. Evaluation of methods using Ray's fluid thioglycollate medium for diagnosis of Perkinsus marinus infection in the eastern oyster, Crassostrea virginicaAnn Rev Fish Dis 4: 201-217, 1994.
Bushek D, Holley R, Kelly M. Treatment of Perkinsus marinus-contaminated materials. J Shellfish Res 16: 330, 1997.
Calvo G.W, Burreson EM. In vitro and in vivo effects of eight chemotherapeutants on the oyster parasite Perkinsus marinus (Mackin, Owen, and Collier). J Shellfish Res 13: 101-107, 1994.
Fisher WS, Oliver LM. A whole-oyster procedure for diagnosis of Perkinsus marinus disease using Ray's fluid thioglycollate culture medium. J Shellfish Res 15: 109-117,1996.
OIE (2006) Manual of Diagnostic Tests for Aquatic Animals.World Organisation for Animal Health (http://www.oie.int).
Reece KS, Bushek D, Hudson KL, Graves JE. Geographic distribution of Perkinsus marinus genetic strains along the Atlantic and Gulf coasts of the USA. Marine Biol 139: 1047-1055, 2001.
Robledo JAF, Gauthier JD, Coss CA, Wright AC, Vasta G.R. Species-specificity and sensitivity of a PCR-based assay for Perkinsus marinus in the eastern Oyster, Crassostrea virginica: a comparison with the fluid thioglycollate assay. J Parasitol 84: 1237-1244, 1998.
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