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對蝦肝胰腺細小病毒症
疾病代碼: DIS00196
作 者: 黃旭田
中文病名: 對蝦肝胰腺細小病毒症
英文病名: Hepatopancreatic parvovirus of penaeid
疾病描述: 1.病原:
病原型別:病毒(virus)
病原環境:海水及半淡鹼水(marine & brackish water)
學名:DNA細小病毒(Parvovirus)
病名(及俗名):肝胰腺細小病毒症(Hepatopancreaic parvovirus disease, HPV)
最早發現者:Lightner&Redman( 1985)
OIE狀況:未表列(No Listed)
病原摘要:
為單股DNA病毒 (Single-Strand DNA),在細胞核內增殖並形成圓形或卵圓形包涵體 (inclusion body),經Feulgen氏染色呈陽性反應,病毒顆粒大小隨感染蝦種而有差異;如感染草蝦肝胰腺病毒顆粒為22-24nm(Lightner & Redman, 1985)、感染巴拿馬對蝦(banana shrimp, Penaeus=Fenneropenaeus merguiensis),肝胰腺病毒顆粒為21-22nm(Roubal et al. 1989)、感染斑節蝦(kuruma shrimp, P.=Marsupenaeus japonicus)、肝胰腺病毒顆粒為17-20nm(Spann et al, 1997),平均病毒顆粒為22-24µm。
人畜共通:No
2.病原分類:
單股DNA:細小DNA病毒科(Parvoviridae)、細小DNA病毒亞科(parvoririnae)、細小DNA病毒屬(parvovirus)
命名沿革:parvo-like Viruis (Lightner & Redman, 1985, R),感染中國養殖之中國對蝦(Penaeus chinensis)、新加坡養殖的巴拿馬蝦(P. merguiensis)、科威特養殖之綠虎蝦(P. semisulcatus)及菲律賓養殖之草蝦P. monodon
疾病特性:
主要感染對蝦之後尾幼虫(postlarvae)及稚蝦,一般病蝦外觀無明顯特異症狀,幼體蝦被感染後行動不活潑、食慾減退、生長緩慢、很少蛻皮,體表常有許多共棲性生物或雜物附著;養殖期的幼蝦或成蝦,蝦體瘦弱、體色較深,有些罹病蝦體甲殼表面有大量黑色斑點,有時甲殼腹部肌肉變白,抗逆性能力差,常併發二次性細菌感染,以弧菌(Vibrio spp.)最常見,有時罹病蝦體除繼發性細菌感染外被感染的草蝦P. monodon)常可檢出草蝦桿狀病毒(Monodon baculovirus, MBV=Pm SNPV)及白斑綜合症候群病毒(white spot syndrome virus, WSSV)。(Umesha RK et al, 2003, R),造成甚大的死亡,其死亡率達50~90%,並隨著蝦體增長,病情減輕;種蝦多呈隱性感染而帶病毒
  蝦肝胰腺細小病毒感染之靶的器官為肝胰腺管遠盲端上皮E細胞及前中腸後段上皮細胞,並在細胞核內進行複製,且破壞組織細胞。
  本病毒的感染路徑尚未明白;但由Catap等氏(R)於2003年經口接種草蝦之後尾幼虫,一般於經口感染後第5天與第7天可從肝腺管上皮細胞檢出各含97%與100%之包涵體檢出率,因此,可間接推論,證實草蝦肝胰腺細小病毒症可經口感染。
疾病型態及流行病學
因本病感染蝦體於外觀上並無明顯特徵病變,且種蝦感染常呈隱性感染且帶細小病毒,本病發病型態常為緩慢及累積性死亡率與生長緩慢,一般不是急性感染。本病呈為地方流行性疾病,泛發於韓國、中國大陸黃海地區、台灣、菲律賓、印尼、馬來西亞、泰國、新加坡、澳洲、肯亞、馬達加斯佳、以色列及科威特、墨西哥、宏都拉斯、哥倫比亞、秘魯、厄瓜多爾所養殖及野生之對蝦類(penaeids);南美洲主要是經由亞洲養殖帶毒的對蝦輸入而感染此病,同時南北美洲沿墨西哥西部太平洋沿岸區及EI Salva dor及巴西所養殖及野生的對蝦類均有感染本病毒,蝦肝胰腺細小病毒流行狀態目前呈世性分佈(cosmopolitan distribution)。
病毒可感染中國白對蝦(chinese white shrimp, Penaeus=Fenneropenaeus chinensis=orientalis)、棕虎蝦(brown tiger prawn, P. esculentus)、印度蝦(Indian prawn, P.=Fenneropenaeus indieus)、斑節蝦(kuruma shrimp, P.=Marupenaeus japonicus)、巴拿馬蝦(banana shrimp, P.=Fenneropenaeus merguiensis)、草蝦(black tiger shrimp, P. monodon)、紅尾蝦(redtail, P.=F. penicillatus)、綠虎蝦(green tiger shrimp, P. semisulcatus)、藍蝦(blue shrimp, P.=Litopenaeus stylirostris)、太平洋白蝦(Pacific white shrimp, P.=Litopenaeus vannamei)及P. schmitti等對蝦類
臨床症狀及病理學
典型罹病感染於幼蝦中期,呈現肝胰腺萎縮壞死,生長遲緩、厭食、抗逆性差及蝦體表常被污物或共棲性生物附著,如有水質不良、飼養管理不佳(過度密飼)等狀況下,常併發細菌性二次感染或前述MBV、WSSV等對蝦病毒合併感染,造成更大的損傷。
在組織病理學鏡檢下,可顯見於肝胰腺管及外盲端上皮細胞內具肥大細胞核且具單一明顯嗜鹼性、Feulgen染色陽性之核內包涵體,並壓迫對側取代宿主細胞核仁、細胞核染色質著邊等現象發生。早期病毒感染,一般肝胰腺管上皮細胞呈現小嗜酸性核內包涵體位於細胞核中央靠近核仁,有時可見二個嗜鹼性核內包涵體

病原致病性意義
本病原造成蝦體生長遲緩、厭食及殼等臨床表徵,主要原因為病毒感染肝胰腺管上皮細胞,造成肝胰腺組織細胞變性壞死;相對性肝胰腺為蝦體主要消化器官,一但主要消化器官功能不佳,則無法行使正常養份的消化吸收等代謝行為,因此,相對使蝦體無法獲取充分的能量來源,故臨床上表現生長延緩、厭食、殼、肝胰腺萎縮等症狀。
同時本病毒隨著感染蝦種的不同,呈現病毒基因體上的差異;Ligthner(1994.R)氏比較感染馬來西亞淡水長腳大蝦(HPV-Mac)及養殖於韓國之中國對蝦(HPV-chin)等所分離的二株肝胰腺細小病毒,除了形態學上的大小差異外,受HPV-chin感染的病主細胞核明顯腫脹,而HPV-Mac感染後宿主細胞核無明顯變化,同時選殖了HPV-chin部分基因組,經Dig標示後製備成探針,可檢測到許多地區不同種類的對蝦HPV病毒,但不能用於檢測印度大平洋地區的草蝦">草蝦及巴拿馬蝦之HPV感染,說明HPV存在著基因差異較大的不同株系。細小病毒科的成員其基因組與核蛋白衣之構造形態有以下兩個獨特的表徵(Bonami et al, 1995. R);一病毒包裏正負鏈比例差別很大,這一點類似細小病毒屬而不象節肢動物的濃核病毒屬(densovirus),而HPV在宿主細胞內形成嗜鹼性核內包涵體此一特徵又與濃核病毒屬相吻合,二HPV只含一條54kd的多肽,在細小病毒科中是非常特殊的現象,一般細小病毒屬(parvovirus)及依賴性病毒屬(dependovirus)具有三條多肽,濃核病毒屬有四條多肽。
診斷方法: 一級初步診斷:
依據臨床症狀及蝦體之病變,尤其是肝胰腺的病變表徵,如萎縮或蒼白,可行肝胰腺塗抹片染染色鏡檢(使用Wight’s、Giemsa’s或孔雀綠染色液),可見本病毒早期感染時,呈現小嗜酸性核內包涵體於核仁邊,而成熟的HPV包涵體,則呈現肥大細胞核內俱有大之嗜鹼性包涵體
二級初步診斷:目前尚無分離培養方法。
三級初步診斷:目前尚無可應用的方法。
一級確定診斷:
依據臨床狀及肉眼病變,罹病蝦體呈現生長延遲、食慾不良、抗逆性適應差及肝胰腺呈現萎縮或蒼白。
二級確定診斷:目前尚無基因型或血清型的報導,唯本病毒感染蝦種的不同,呈現基因組的差異,HPV-chin(韓國所飼養罹患HPV感染之中國對蝦分離株)之基因組4至4.3kb,而HPV-mon(泰國所飼養罹患HPV感染之草蝦分離株)基因組為5.8kb。(Bonami et al. 1995;Sukhumsirichart et al., 1999, R)。
三級確定診斷:
 一、使用聚合酶鏈鎖反應(Polymerase chain reaction, PCR)檢查,則可確定病原感染,依據各學者發表的文獻,有幾個primer套組可應用:
   1.Phromjai et al.(2001)
7490F : 5′-TGG-AGG-TGA-GAC-AGC-AGG-3′
7852F : 5′CCA-ACT-GTC-CTT-CGC-TCT-3′
PCR產物估計732bp
2.Manjanaik et al.(2005), Phronjai et al.(2002)及Manjanaik et al.(2005)
H441F : 5′-GCA-TTA-CAA-GAC-CCA-AGC-AG-3′
H441R : 5′-ACA-CTC-AGC-CTC-CTC-TAC-CTT-GT-3′
PCR產物估計441bp
3.La Fauce et al.(2006)
   140F : 5′-CTA-CTC-CAA-TGG-AAA-CTT-CTG-AGC-3′
140R :5′-GTG-GCG-TTG-GAA-GGC-ACT-TC-3′
PCR產物估計140bp
二、應用原位雜交法(in situ hybridization)條所使用的primer套組(Pantoja & Lightner, 2000, R)
1120F : 5′-GGT-GAT-GTG-GAG-GAG-AGA-3′
1120R : 5′-GTA-ACT-ATC-GCC-GCC-ACC-3′
PCR產物估計592bp,然後用Dig-11-dUTP逢機標示592bp產生,形成probe EC592,來檢測發病之蝦體。
可參考本章所附文獻內詳述的方法操作檢測。
治療方法: 目前無可應用的治療方法。
預防控制方法: 對蝦病毒性疾病一般均無有效之治療方法,首著重於預防控制,對於養殖場要建立疫病之預警、監測工作,於疫病流行況狀(包括流行季節、區域、條件等流行規律)進行調查,做為養殖場之參考依據;同時感染發病之養殖蝦場不能移動且需嚴格管控,並採取緊急消毒防疫等措施;再者必需作好養殖場之水質管理(包括:水源的選擇、日常養殖水環境之消毒);目前國外流行於水環境中使用微生態製劑,利用有益微生物,來降低水中及生物體內溶解有機物之含量,防止有害物質如氨等含氮化合物的累積增加,保持良好的水質;引進蝦苗養殖前先做好養殖場內之爛泥清除、曝曬及消毒等工作,且需調節養殖池水之藻相;使用的蝦苗必先經過檢查,為無特定性病原之健康蝦苗,在日常飼料餵食中,可添加免疫促進劑如免疫多糖、生物碱、氨基酸多肽類增加蝦體非特異性免疫,增強抵抗疾病之能力。配合日常的飼養管理,不要過度飼養、餵食、保持穩定水色藻相,注意蝦場餵食時蝦體活動狀況;如果顯現臨床異狀,則需馬上檢討及送檢相關水產疾病檢驗機構、切忌亂予投葯,浪費資源,相信應可做好養殖場的防疫工作,並帶來豐碩的成果。
相關圖片:
參考文獻: 1.Bonami JR, Mari J, Poulos BT, Lightner DV. Characterization of hepatopancreatic parvo-like virus, a second unusual parvovirus pathogenic for penaeid shrims. Journal of General Virology. 1995; 76:813-817.
2.Manjanaik B, Umesha KR, karanasagar I, karunasagar I. Detection of hepatopancreatic parvovirus(HPV)in wild shrimp from India by nested polymerase chain reaction (PCR). Dis. Aquat. Org. 2005 ; 63:255-259.
3.Pantoja. CR, Lightner DV. A non-destructive method based on the polymerase chain reaction for detection of hepatopancretion parvovirus(HPV)of penaeid shrimp. Dis. Aquat. Org. 2000; 39:177-182.
4.Phromjai J, Sukhumsirichart W, Pantoja C, Lightner DV, Flegel TW. Different reactions obtained using the same DNA detection reagents for Thai and Korean hepatopancratic parvovirus of penaeid shimp. Dis. Aquat. Org. 2001; 46:153-158.
5.Phromjai J, Boonsaeng V, Withyachumnarnkal B, Flegel TW. Detection of hepatopancreatic parvovirus in Thai shrimp Penaeus monodon by in situ hybridization, dot blot hybridization and PCR amplication. Dis. Aquat. Org. 2002; 51:227-232.
6.Pantoja CR, Lightner DV. Detection of hepatopancreatic parvovirus(HPV)of penaied shrimp by in situ hybridization at the electron microscope level .Dis. Aquat. Org. 2001; 44:87-96.
7.Catap ES, Lavilla-Pitogo CR, Maeno Y, Travina RD. Occurrence, histopathology and experimental transmission of hepatopancreatic parvovirus infection in Penaeus monodon postlarvae. Dis. Aquat. Org. 2003; 57:11-17.
8.Umesha RK, Uma A, Otta SK, Karanasagar I. Detection by PCR of hepatopancreatic parvovirus(HPV)and other viruses in hatchery-reared Penaeus monodon postlarvae. Dis. Aquat. Org. 2003; 57:141-146.
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